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生化试剂盒
- 醇酰基转移酶（AAT）活性测定试剂盒-可见分光光度法
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凯发K8旗舰生物生化试剂盒应用领域广泛，涉及酶类、氧化应激、铁死亡、肝功能、肾功能、糖酵解、无机盐离子、脂质代谢、植物抗逆性等。检测样本类型丰富，涉及多种体液、组织、细胞、食品、植物、药物、化妆品等。主要的检测仪器为酶标仪，分光光度计和荧光酶标仪。我们将以高度的责任感和出色的产品质量为客户给予高效专业的生化代测服务和实验技术解决方案。丰富的经验、优良的品质、充足的库存、准确的交货时间、极具竞争力的价格，所有这些保证了我们向您给予的最专业最优质的服务。
| 中文名称 |
醇酰基转移酶（AAT）活性测定试剂盒 |
| 规格 | 24样 |
| 货号 |
L-770-SH |
| 价格 | ￥2000 |
| 样本类型 | 血清，血浆，组织匀浆，细胞裂解液、细胞培养上清液等 |
| 检测范围 | 详见说明书 |
| 检测方法 |
可见分光光度法 |
| 货期 | 3-5天 |
| 说明书 | 咨询我司业务员获取 |
| 文献 | 咨询我司业务员获取 |
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
AAT是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。
测定原理：
AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇，释放的CoA还原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，测定412 nm吸光度增加速率可计算AAT活性。
自备仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、无水乙醇。
试剂组成和配制：
提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。
试剂三：粉剂×1支，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 液体：直接检测。
AAT测定操作：
1、分光光度计预热30min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用前在试剂二瓶中加入22.5mL试剂一，充分混匀待用。用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、试剂三的配制：临用前加无水乙醇1.25mL充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入50μL提取液和900μL工作液，充分混匀，35℃反应15min，加入50μL试剂三，充分混匀，25℃静置10min，测定412nm处吸光值，记为A空白管。
5、 测定管：在Ep管或96孔板中加入50μL样本和900μL工作液，充分混匀，35℃反应15min，加入50μL试剂三，充分混匀，25℃静置10min，测定412nm处吸光值，记为A测定管。△A=A测定管- A空白管，空白管只要做一管。
AAT活性计算公式：
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（
×d）×V反总÷（V样×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /g 鲜重) = △A ÷（
×d）×V反总÷(W×V样÷V样总) ÷T = 98.04×△A÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷（
×d）×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T
= 98.04×△A÷ 细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：每毫升样品每分钟催化产生1nmol TNB定义为一个酶活单位。
AAT (nmol/min /mL) = △A ÷（
×d）×V反总÷V样÷T =98.04×△A
：TNB消光系数，13600L/mol/cm；V反总：反应总体积，1mL；V样：加入反应体系中上清液体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白含量，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，15 min。
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